奥林巴斯CX33显微镜观察野生线虫

使用奥林巴斯CX33显微镜观察野生线虫时，需遵循规范的操作流程并关注关键细节，以确保观察效果并保护设备。以下是具体步骤与注意事项：

一、实验前准备

显微镜检查与调试

将CX33显微镜放置在稳固的实验平台上，稍微向左倾斜，距离平台边缘约7厘米，确保稳定性。

检查各部件是否完好，包括目镜、物镜（通常配备4×、10×、40×物镜，观察线虫建议使用10×或40×）、光源模块及电源线。

打开LED光源，调节亮度至适中（建议从低亮度开始逐步增加），避免光线过强导致线虫应激或观察不适。

样本制备

线虫固定：野生线虫需先麻醉以减少运动干扰。常用方法包括：

化学麻醉：将线虫置于含0.1% Levamisole（左旋咪唑）或5mM NaN₃的M9缓冲液中，麻醉时间约5-10分钟。

低温麻醉：将载玻片置于冰上短暂冷却（需控制时间，避免线虫死亡）。

制片：

在载玻片上滴加适量线虫悬浮液（如M9缓冲液中的线虫溶液）。

覆盖盖玻片时，先让一侧接触液滴，缓慢放下另一侧以避免气泡产生。

用吸水纸从盖玻片边缘吸去多余液体，防止样本移动。

二、显微镜操作步骤

低倍镜定位

旋转物镜转换器，将10×物镜对准光孔（物镜前端与载玻片保持约2cm距离）。

调节粗调焦旋钮，使载物台缓慢上升，直到物镜接近盖玻片（注意观察物镜，防止接触）。

左眼注视目镜，反向转动粗调焦旋钮，使载物台缓慢下降，直到视野中出现线虫轮廓。

轻微转动微调焦旋钮，使图像更清晰，同时移动载物台（通过X-Y旋钮）找到目标线虫。

高倍镜观察

在低倍镜下将目标线虫调整至视野中心后，旋转物镜转换器，切换至40×物镜。

由于高倍镜下视野变暗，需适当增加光源亮度，并调节孔径光阑（向左或向右移动光阑拉杆，使其指针与物镜放大倍率匹配），以优化对比度和分辨率。

使用微调焦旋钮精细对焦，观察线虫的形态细节（如体壁、消化道、生殖腺等结构）。

关键观察要点

形态特征：野生线虫通常体长约1mm，直径约50μm，需观察其整体形态（如弯曲程度、体表光滑度）及内部器官结构。

运动行为：若未麻醉，线虫可能呈现缓慢蠕动或摆动，需记录其运动模式（如波浪式前进、头部摆动频率）。

对比度优化：通过调节孔径光阑或使用相差环（若配备相差物镜），增强线虫与背景的对比度，便于观察透明结构。

三、注意事项与优化技巧

避免样本损伤

麻醉剂浓度和时间需严格控制，避免线虫死亡或形态改变（如体腔膨胀）。

盖玻片压力要均匀，防止压碎线虫或产生人工伪影。

设备保护

操作物镜转换器时，避免用手直接握住物镜旋转，防止物镜松动或损坏。

使用高倍物镜（如40×）时，需先在低倍镜下定位，再切换至高倍镜，防止物镜与载玻片碰撞。

图像记录

若需保存观察结果，可连接数码相机或图像采集系统（通过C接口连接三目镜筒），调整相机参数（如曝光时间、白平衡）后拍摄清晰图像。

拍摄时保持显微镜稳定，避免手部震动导致图像模糊。

四、应用场景

形态学研究：观察野生线虫的种属特征（如口针形状、尾端结构），辅助分类鉴定。

行为学分析：记录线虫在特定环境（如不同温度、化学物质刺激）下的运动响应，研究其应激机制。

教学示范：通过实时观察线虫形态与行为，帮助学生理解无脊椎动物生物学特性。