徕卡DM750 P偏光显微镜观察西药结晶晶体颗粒

使用徕卡 DM750 P 偏光显微镜观察西药结晶晶体颗粒，需结合其光学特性与药物晶体的双折射现象，以下为具体操作指南及分析要点：

一、徕卡 DM750 P 的适配性优势

无应力光学系统：

DM750 P 采用偏振等级 5 的无应力物镜（如 63 倍物镜），避免光学部件自身双折射干扰，确保药物晶体的真实双折射信号（如磺胺类、阿司匹林晶体的典型干涉色）。

宽范围物镜组合：

2.5 倍概览物镜：快速定位晶体分布（如片剂崩解后的颗粒聚集区）；

10-40 倍物镜：观察晶体形态（针状、片状、棱柱状）及团聚状态；

63 倍油镜：解析晶体边缘细节（如晶面夹角、解理纹）。

智能偏光控制：

内置可旋转起偏器（0-360°）和固定检偏器（正交 / 平行模式），支持一键切换明场 / 偏光模式，适合西药颗粒的动态观察（如溶剂挥发过程中晶体生长）。

二、样品制备与观察流程

1. 样品预处理

混悬液法：将西药颗粒（如原料药粉末）分散于液体石蜡或甘油中，避免静电团聚，厚度≤50μm（防止光程过长导致干涉色饱和）。

薄片法：针对片剂或胶囊内容物，用刀片刮取少量样品，夹于载玻片 - 盖玻片之间，轻压成单层颗粒（适合晶型一致性分析）。

注意：避免高温制片（如熔融结晶），防止晶型转变（如布洛芬的 α/β 晶型差异）。

2. 显微镜参数设置

光路校准：

开启内置 LED 光源（产热低，避免晶体热损伤），调节亮度至 10-20%（保护人眼同时减少光漂白）；

旋转起偏器至 0°，检偏器至 90°（正交偏光），观察空白载玻片应呈全暗（验证偏光正交性）。

载物台校准：

确保旋转载物台中心与物镜光轴重合（通过十字刻度校准，误差＜5μm），避免晶体旋转时偏离视野（适合晶轴定向分析）。

3. 观察与记录

正交偏光下的典型现象：

消光现象：旋转载物台（0-360°），晶体每转 90° 出现一次消光（各向异性晶体特征，如对乙酰氨基酚的单斜晶系）；

干涉色：根据晶体厚度和双折射率，呈现彩虹色（如磺胺嘧啶银的一级灰至二级蓝），结合石膏试板（λ=550nm）定量双折射值；

晶体形态：记录颗粒长宽比（如阿莫西林的针状晶体长径比＞5:1）、边缘规整性（区分单晶与多晶聚集体）。

动态观察：

开启延时摄影（如每 5 分钟拍摄一次），监测溶剂挥发过程中晶体的析出顺序（如盐酸氨溴索从无定形到晶体的转变）。

三、西药晶体分析关键指标

晶型鉴别：

单折射晶体（如氯化钠）：全消光，无干涉色；

双折射晶体（如布洛芬）：旋转载物台出现四次消光，干涉色随厚度变化；

混晶判断：视野中同时存在多种干涉色或消光行为（如卡马西平的 Form I/III 混晶）。

颗粒表征：

尺寸分布：通过徕卡 LAS X 软件测量等效圆直径（如 API 颗粒 D50 应＜20μm 以保证溶出度）；

表面纹理：观察解理裂纹（如乙酰水杨酸的劈裂面）、台阶状生长纹（提示结晶动力学）。

纯度评估：

杂质晶体（如中间体残留）常表现为异常干涉色或消光行为（如扑尔敏中混有马来酸杂质时，出现局部强双折射）。

四、注意事项与进阶技巧

光程补偿：

对于厚晶体（＞100μm），使用 λ/4 波片补偿光程，避免高阶干涉色重叠（如头孢呋辛酯的柱状晶体）。

环境控制：

开启显微镜内置温台（37℃±0.1℃），模拟体内溶出环境，观察温度敏感型晶体的相变（如茶碱的水合物脱水过程）。

联用技术：

偏光结果结合 XRD（确认晶型）、DSC（热稳定性），例如：通过偏光发现某批次硝苯地平晶体出现异常消光，进一步 XRD 证实为亚稳态 Form B。

五、典型案例：阿司匹林晶体观察

样品：阿司匹林原料药粉末（乙醇重结晶）；

观察：正交偏光下呈菱形片状，旋转载物台至 45° 时出现二级黄干涉色，消光角与晶面夹角吻合（证实单斜晶系）；

分析：边缘光滑无裂纹，提示结晶工艺稳定；无杂色颗粒，纯度＞99.5%（符合药典标准）。

通过徕卡 DM750 P 的高分辨率偏光成像与智能分析，可快速实现西药晶体的晶型鉴别、颗粒表征及工艺优化，尤其适用于原料药质控、仿制药一致性评价及结晶工艺开发。