奥林巴斯CX33显微镜明场 荧光观察菌丝孢子

使用奥林巴斯 CX33 显微镜明场和荧光观察菌丝孢子，可参考以下方法：

明场观察

样品准备：

水浸法：取少量菌丝置于载玻片，滴加蒸馏水后加盖玻片，适用于观察活体菌丝动态。

乳酸酚棉蓝染色法：对菌丝与孢子进行对比染色，增强结构可见性。例如，曲霉菌丝的分生孢子梗经染色后，顶囊、小梗及分生孢子层次分明。

显微镜设置：

打开显微镜电源，调节亮度调节旋钮，使内置 2.4W LED 透射光柯勒照明系统提供合适的亮度，该系统可提供均匀冷光源，避免热损伤菌丝。

根据需要选择合适的平场消色差物镜，如 4X 或 10X 物镜用于低倍定位，40X 或 100X 物镜用于高倍观察。奥林巴斯 CX33 的物镜可有效消除像差，确保菌丝与孢子在全视场内清晰成像。

调节载物台高度，其垂直运动行程 15mm，粗调每圈 36.8mm，微调精度 2.5μm，支持从低倍快速定位到高倍精细聚焦。

调节三目观察筒的瞳距，调节范围 48 - 75mm，其 30° 倾斜设计符合人体工学，减少观察疲劳。同时，可根据需要将光路切换为目镜观察或相机光路，便于实时记录。

观察与记录：

低倍定位：使用 4X 或 10X 物镜，通过粗调旋钮快速定位菌落边缘。

高倍观察：切换至 40X 或 100X 物镜，微调焦距至图像清晰，观察菌丝有无隔膜、分支角度（如对生、互生）及孢子形态（如大小、颜色、表面纹饰）。

图像采集：连接 DP27 相机等成像设备，通过 cellSens 软件记录菌丝网络与孢子分布特征。

荧光观察

样品准备：

选择合适的荧光染料对菌丝孢子进行染色。例如，可使用 Calcofluor White 等染料对真菌细胞壁进行染色，使其在荧光下发出明亮的信号。将菌丝孢子样品与染料按照一定的比例混合，在适当的条件下孵育一段时间，然后用缓冲液冲洗，去除未结合的染料，制成荧光染色的样品玻片。

显微镜设置：

安装荧光模块：如果 CX33 显微镜本身未配备荧光装置，需要安装合适的荧光附件，如荧光光源及相应的滤光片组。确保荧光光源的强度和稳定性，以及滤光片的选择与所使用的荧光染料相匹配，以实现最佳的荧光激发和发射效果。例如，对于常见的蓝色荧光染料，可选择激发波长为 450 - 490nm，发射波长为 515 - 555nm 的滤光片组。

切换观察模式：将显微镜的观察模式切换为荧光模式。通常需要将聚光器转盘设置到荧光（FL）位置，以阻挡透射光，减少背景噪音。

观察与记录：

调节荧光亮度和焦距：打开荧光光源，调节亮度至合适的水平，避免荧光信号过强或过弱。同时，通过微调旋钮精确调节焦距，使菌丝孢子的荧光图像清晰可见。

观察荧光分布和特征：在荧光显微镜下，观察菌丝孢子发出的荧光颜色、强度、分布等特征。不同的荧光染料可能会标记不同的细胞结构或成分，通过观察荧光的分布可以了解菌丝孢子的内部结构和生理状态。例如，某些染料可能特异性地标记细胞核、细胞壁或细胞质，从而帮助区分不同的细胞部位。

图像采集与分析：使用显微镜配套的数码成像系统，如连接相机并通过相关软件进行图像采集和分析。可以拍摄不同视野下的荧光图像，记录菌丝孢子的荧光形态和分布情况，以便后续进一步分析和比较。

观察结束后，关闭显微镜电源，对显微镜进行清洁和维护，将物镜转离光路，取下样品玻片，用干净的软布擦拭载物台和物镜等部件，保持显微镜的清洁和良好状态，以便下次使用。