奥林巴斯SZ61体视显微镜观察小麦嫩芽

一、样品预处理（维持嫩芽活性与结构完整）

1. 取材与固定

• 选材标准：选取萌发 3-7 天的小麦幼苗（芽长 1-2 cm），优先选择长势一致、无机械损伤的嫩芽，避免老化或病弱样本。

• 截取方法：用解剖刀在芽基下方 1-2 mm 处斜切（减少水分流失），保留完整的芽鞘、生长点及幼叶，立即置于载玻片上。

• 临时固定：滴 1-2 滴蒸馏水或 0.5% 琼脂糖溶液（40℃温热后冷却），轻轻覆盖盖玻片（避免气泡压迫嫩芽），若需长时间观察，可改用底部透气的培养皿（如 Cellvis 玻璃底培养皿），保持湿度。

2. 对比度增强（针对透明组织）

• 简易染色：用 0.05% 中性红溶液染色 1-2 分钟，水洗后观察（液泡呈红色，细胞壁无色），或用 1% 碘 - 碘化钾溶液染色（淀粉粒呈蓝色，适用于胚乳附近组织）。

• 物理修饰：若嫩芽表面光滑导致反光，可在载玻片底部垫一层薄纱布（散射光线，减少镜面反射）。

二、显微镜参数设置与操作技巧

1. 光学系统调节

2. 特殊功能应用

• 立体观察：利用 SZ61 的双光路设计，轻微左右移动头部，感知嫩芽的三维结构（如芽鞘包裹的幼叶卷曲程度）。

• 光阑调节：旋转底座光阑至 “小光圈"（缩小通光孔径），增加反差，凸显嫩芽边缘轮廓（尤其适用于透明幼叶）。

三、重点观察区域与特征记录

1. 生长点（分生组织）

• 低倍观察：可见芽顶端半透明圆锥状突起，直径约 0.1-0.2 mm，周围环绕叶原基（小叶片状结构）。

• 高倍观察：切换 4.5× 物镜，观察细胞排列（密集、无明显液泡），若染色可见细胞核（DAPI 染色呈蓝色），偶见分裂期细胞（染色体凝聚）。

2. 芽鞘与幼叶

• 芽鞘结构：管状包裹幼叶，表皮细胞呈长条形，斜射光下可见表皮毛（透明单细胞绒毛，长度 50-100 μm）。

• 幼叶展开动态：记录叶尖从芽鞘伸出的角度（每日同一时间测量），正常生长时每日展开 10°-15°，逆境下（如干旱）展开速率降低。

3. 维管束分化

• 用 1% 番红染色 5 分钟，水洗后观察：木质部导管呈红色，分布于芽鞘与幼叶中脉，低倍下呈红色线条状，高倍可见导管分子的环纹或螺纹加厚。

四、动态记录与定量分析

1. 延时摄影设置

• 硬件连接：通过三目镜筒接入 DP27 相机（或手机适配器），使用 CellSens 软件设置拍摄参数：

• 间隔：生长旺盛期（1-3 天芽）15-30 分钟 / 张，缓慢生长期（4-7 天芽）1-2 小时 / 张；

• 时长：连续拍摄 24-48 小时，保存为 TIFF 序列（避免 JPG 压缩失真）。

• 环境控制：显微镜旁放置湿度计（湿度≥60%），温度维持 22±2℃（可用加热垫包裹载物台）。

2. 定量分析方法

五、常见问题与解决方案

六、设备维护与安全提示

1. 清洁保养：

• 观察后用无尘布蘸 75% 乙醇擦拭载物台，避免琼脂糖或染液残留；

• 若物镜沾染污渍，用镜头纸蘸无水乙醇轻轻擦拭（沿一个方向，避免来回摩擦）。

2. 安全操作：

• 染色剂（如碘液）需戴手套操作，避免接触皮肤；

• 长时间观察时，每 1 小时暂停 5 分钟，防止光源过热影响设备寿命。