奥林巴斯CX33显微镜明场 相差观察酵母细菌

奥林巴斯CX33显微镜明场与相差观察酵母、细菌的方法及要点

奥林巴斯CX33显微镜是一款正置生物显微镜，支持明场（Brightfield, BF）和相差（Phase Contrast, PC）两种观察模式，适用于酵母、细菌等微生物的形态学研究。以下从观察原理、操作步骤、注意事项等方面展开分析：

一、明场观察酵母与细菌

1. 原理
明场观察通过透射光直接成像，适合观察染色或高对比度样本（如细菌涂片染色、酵母细胞固定后染色）。酵母细胞较大（约5-10μm），细菌较小（约0.5-5μm），明场下需高倍物镜（如40X、100X）和良好调焦才能清晰观察。

2. 操作步骤

• 样本制备：

• 细菌：取菌液涂片，热固定后染色（如革兰氏染色），滴加香柏油。

• 酵母：取酵母液涂片，固定后染色（如美蓝染色），滴加香柏油。

• 显微镜设置：

• 切换至明场模式，选择10X目镜和40X或100X物镜。

• 调节光源亮度至适中，粗调焦后微调至清晰。

3. 观察要点

• 细菌：观察形态（杆状、球状）、排列方式（链状、簇状）及染色特性（革兰氏阳性/阴性）。

• 酵母：观察细胞形态（椭圆形、圆形）、出芽生殖及细胞内含物（如淀粉粒）。

4. 优缺点

• 优点：操作简单，适合染色样本。

• 缺点：未染色样本对比度低，细菌观察困难。

二、相差观察酵母与细菌

1. 原理
相差观察通过物镜和聚光镜中的相差环（Phase Ring）将光程差转化为振幅差，增强未染色透明样本的对比度。适合观察活细胞或未染色样本（如酵母培养液、细菌悬液）。

2. 操作步骤

• 样本制备：

• 细菌：取新鲜菌液，滴加至载玻片，盖上盖玻片（避免气泡）。

• 酵母：取酵母培养液，滴加至载玻片，盖上盖玻片。

• 显微镜设置：

• 切换至相差模式，安装相差物镜（如10X、40X）和相差聚光镜。

• 调节光源亮度至适中，粗调焦后微调至清晰。

3. 观察要点

• 细菌：观察运动性、形态（如弧菌的弯曲状）及细胞内结构（如核区）。

• 酵母：观察出芽生殖、假菌丝形成及细胞内颗粒（如肝糖粒）。

4. 优缺点

• 优点：无需染色，可观察活细胞动态。

• 缺点：背景较亮，需调节光源亮度；高倍物镜下相差环易偏移，需重新对焦。

三、奥林巴斯CX33显微镜的操作建议

1. 物镜选择：

• 明场观察：建议使用40X或100X油镜（需滴加香柏油）。

• 相差观察：建议使用10X或40X相差物镜（无需油镜）。

2. 光源调节：

• 明场观察：光源亮度调至中等，避免过亮导致染色样本褪色。

• 相差观察：光源亮度调至较低，增强对比度。

3. 调焦技巧：

• 相差观察时，需先在低倍（10X）下找到细胞，再切换至高倍（40X）。

• 高倍物镜下，微调焦距时需缓慢旋转，避免细胞移出视野。

四、常见问题及解决方案

五、总结

• 明场观察：适合染色样本，操作简单，但未染色样本对比度低。

• 相差观察：适合未染色或活细胞样本，可增强对比度，但需调节光源和相差环。

• 奥林巴斯CX33优势：支持明场与相差双模式，操作便捷，适合微生物形态学研究。

通过合理选择观察模式和优化操作步骤，可高效利用CX33显微镜观察酵母与细菌的形态特征。