奥林巴斯进口显微镜CX43荧光转染观察方法

使用奥林巴斯进口显微镜 CX43 进行荧光转染观察，可按照以下步骤进行操作，以清晰观察到荧光转染后的细胞状态及荧光表达情况：

实验准备

确保已完成细胞的荧光转染操作，并在合适的时间点将细胞准备好用于观察。转染后的细胞需在培养器皿（如培养皿、多孔板）中培养，使其达到适宜观察的状态。

准备好显微镜配套的荧光滤光片组，根据所使用的荧光标记物选择合适的滤光片。常见的荧光标记物有绿色荧光蛋白（GFP）、红色荧光蛋白（RFP）等，不同的荧光蛋白需要使用对应的激发光和发射光滤光片。

打开奥林巴斯显微镜 CX43 的电源，预热光源，让其稳定发光，同时调节显微镜的亮度至适中水平。

放置样本

将含有转染细胞的培养器皿小心放置在显微镜的载物台上，使用载物台上的固定装置（如玻片夹）将其固定好，避免在观察过程中发生移动。

通过载物台的移动旋钮，将培养器皿中的细胞区域移动到物镜的正下方，使需要观察的部位大致处于视野中心位置。

低倍镜观察定位

转动物镜转换器，将低倍物镜（如 4 倍或 10 倍）转至工作位置，使其对准通光孔。

从侧面注视物镜，同时转动粗准焦螺旋，使载物台缓慢上升，直到物镜接近培养器皿（注意不要让物镜碰到培养器皿，一般距离约 0.5 - 1 厘米）。

从目镜中观察，缓慢转动粗准焦螺旋，使载物台下降，直到看到模糊的细胞图像。再转动细准焦螺旋，使细胞图像清晰。

在低倍镜下观察整个细胞培养区域，找到细胞分布较为均匀且荧光表达相对明显的区域，将其移至视野中央，以便后续切换高倍镜进行详细观察。

荧光观察模式切换

确定好观察区域后，切换显微镜至荧光观察模式。根据所使用的荧光标记物，选择对应的荧光滤光片组。例如，观察 GFP 标记的细胞，需选择能够激发绿色荧光并过滤出相应发射光的滤光片组。

打开荧光光源，调节荧光光源的强度，避免过强的荧光导致细胞图像过曝或荧光淬灭，同时也要确保能够清晰观察到荧光信号。

高倍镜观察

转动物镜转换器，换用高倍物镜（如 20 倍或 40 倍）进行更详细的观察。由于高倍物镜的工作距离较短，此时不能再使用粗准焦螺旋，只能通过转动细准焦螺旋来微调焦距，使细胞和荧光图像清晰。

在高倍镜下仔细观察细胞的形态、荧光的分布和强度。注意观察荧光是在细胞的哪个部位表达，如细胞质、细胞核或细胞膜等，以及荧光的表达是否均匀。同时，观察不同细胞之间荧光表达的差异。

图像采集与记录

使用显微镜配备的数码摄像头或连接电脑的图像采集系统，拍摄观察到的细胞荧光图像。可以拍摄不同视野、不同曝光时间下的图像，以获取最佳的观察效果。

在拍摄图像时，记录下图像的放大倍数、荧光滤光片组的选择、曝光时间等参数，以便后续对图像进行分析和对比。

对拍摄的图像进行标注，注明样本的来源、转染的时间、观察的时间等信息，方便实验数据的整理和分析。

观察结束与设备维护

观察结束后，关闭荧光光源和显微镜的电源。将培养器皿从载物台上取下，按照实验室的废弃物处理规定进行处置。

清洁显微镜的载物台、物镜、目镜等部件，去除可能残留的细胞培养基或其他污染物。将显微镜恢复到初始状态，妥善保管，定期进行维护和校准，以确保其性能的稳定性和观察的准确性。